Үсемлек һәм патоген материаллары
Иллинойс Университетында (хәзерге вакытта Калифорния Университетында) доктор Пэт Браун тарафыннан сорго конверсия популяциясе (SCP) дип аталган сорго ассоциациясе популяциясе картага төшерелгән. Ул элегрәк тасвирланган иде һәм АКШ мохитендә үсемлекләрнең үсешен һәм үсешен җиңеләйтү өчен фотопериодларга сизгер булмаган һәм кечерәк буйлылыкка әйләндерелгән төрле линияләр җыелмасы. Бу тикшеренүдә бу популяциядән 510 линия кулланылды, гәрчә начар шыту һәм башка сыйфат контроле проблемалары аркасында, өч билгенең дә анализында барлык линияләр дә кулланылмады. Ахыр чиктә, 345 линиядән алынган мәгълүматлар хитин җавабын анализлау өчен, 472 линия flg22 җавабын һәм 456 линия TLS каршылыгын анализлау өчен кулланылды.B. кукиLSLP18 штаммы Арканзас Университетында доктор Берт Блумнан алынган.
MAMP җавап үлчәү
Бу тикшеренүдә ике төрле MAMP flg22 (Genscript каталогы # RP19986) һәм хитин кулланылды. Сорго үсемлекләре теплицада туфрак (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) белән тутырылган яссылыкларга салынган өстәмәләрдә үстерелде. җыйган көнне яфракларда артык дым булмасын өчен, үсемлекләргә үрнәк җыю алдыннан бер көн элек су сибелде.
Линияләр очраклы рәвештә сайланган һәм, логистик сәбәпләр аркасында, 60 линадан партияләргә бүленеп утыртылган. Һәр лина өчен өч "чүлмәк" утыртылган, һәр лина өчен ике орлык салынган. Киләсе партияләр, алдагы партия эшкәртелгәннән соң, бөтен популяция бәяләнмәгәнче утыртылган. Ике MAMP өчен дә ике эксперименталь сынау үткәрелде, ике сынауның һәрберсендә генотиплар яңадан очраклы рәвештә сайланган.
ROS анализлары элек тасвирланганча үткәрелде. Кыскасы, һәр линия өчен 3 төрле чүлмәккә алты орлык утыртылды. Нәтиҗәдә үсентеләр арасыннан өчесе бер төрлелеккә нигезләнеп сайланды. Гадәттән тыш күренгән яки күпчелек үсентеләрдән шактый озынрак яки кыскарак үсентеләр кулланылмады. Өч төрле 15 көнлек сорго үсемлегенең 4 нче яфрагының иң киң өлешеннән диаметры 3 мм булган дүрт яфрак дискы алынды. Ике үсемлектән бер яфракка бер диск һәм бер үсемлектән ике диск, икенче диск су контроле булды (түбәндә карагыз). Дисклар аерым-аерым 50 мкл H2O кара 96 чокырлы пластинада йөзеп йөртелде, яктылыкка дучар булмас өчен алюминий мөһер белән ябылды һәм төнлә бүлмә температурасында тотылды. Икенче көнне иртән 2 мг/мл хемилюминесцент зонд L-012 (Wako, каталог № 120-04891), 2 мг/мл хрен пероксидазасы (VI-A тибындагы, Sigma-Aldrich, каталог № P6782) һәм 100 мг/мл Хитин яки 2 мкМ Flg22 кулланып реакция эремәсе ясалды. Бу реакция эремәсеннән 50 мкл дүрт коеның өчесенә өстәлде. Дүртенче кое макет контроль иде, аңа MAMPсыз реакция эремәсе өстәлде. Һәр тәлинкәгә су гына булган дүрт буш кое да кертелде.
Реакция эремәсен өстәгәннән соң, люминесценция SynergyTM 2 күп детекторлы микропластина укучысы (BioTek) ярдәмендә 1 сәгать дәвамында һәр 2 минут саен үлчәнде. Пластиналы укучы бу 1 сәгать эчендә һәр 2 минут саен люминесценция үлчәүләрен үткәрә. Һәр кое өчен кыйммәт бирү өчен барлык 31 укуның суммасы исәпләнде. Һәр генотип өчен MAMP җавабының якынча кыйммәте (өч эксперименталь коеның уртача люминесценция кыйммәте - макет коесы кыйммәте) - уртача буш кое кыйммәтен алып ташлап исәпләнде. Буш кое кыйммәтләре даими рәвештә нульгә якын иде.
Яфрак дискларыНикотиана бентамиана, сыйфатны контрольдә тоту максатларында һәр 96 коелы пластинага контроль буларак бер югары җавап бирүче сорго линиясе (SC0003) һәм бер түбән җавап бирүче сорго линиясе (PI 6069) кертелгән.
B. кукипрививка әзерләү һәм прививка ясау
B. кукиИнокулятсия элек тасвирланганча әзерләнде. Кыскасы, сорго бөртекләре өч көн суда чылатылды, чайкалды, 1 литрлы конус формасындагы колбаларга тутырылды һәм 15 psi һәм 121 °C температурада бер сәгать автоклавта тотылды. Аннары бөртекләргә яңа культурадан алынган якынча 5 мл мацерацияләнгән мицелий кушылды.B. кукиLSLP18 изолятлары алына һәм бүлмә температурасында 2 атнага калдырыла, колбаларны 3 көн саен селкетеп торалар. 2 атнадан соң, гөмбә белән зарарланган сорго бөртекләре һавада киптерелә, аннары кырда инокуляцияләнгәнче 4 °C температурада саклана. Шул ук инокулят бөтен сынау дәвамында кулланыла һәм ел саен яңасы ясала. Инокуляция өчен, 4-5 атналык сорго үсемлекләре арасына 6-10 зарарланган бөртек урнаштырыла. Бу гөмбәләрдән барлыкка килгән споралар бер атна эчендә яшь сорго үсемлекләрендә инфекция башлана.
Орлык әзерләү
Кырда чәчәр алдыннан сорго орлыгы якынча 1% Spirato 480 FS фунгициды, 4% Sebring 480 FS фунгициды, 3% Sorpro 940 ES орлык сакчысы булган фунгицид, инсектицид һәм саксыз катнашма белән эшкәртелде. Аннары орлыклар 3 көн дәвамында һавада киптерелде, бу орлыклар тирәсендә бу катнашманың юка катламы белән каплануын тәэмин итте. Саксызландыргыч үсентеләр чыкканчы эшкәртү буларак Dual Magnum гербицидын кулланырга мөмкинлек бирде.
Максатлы яфрак тапларына каршы торучанлыкны бәяләү
SCP 2017 елның 14–15 июнендә һәм 2018 елның 20 июнендә Төньяк Каролина штатының Клейтон шәһәрендәге Үзәк культуралар тикшеренү станциясендә очраклы рәвештә сайлап алынган тулы блоклы дизайнда, һәр очракта ике эксперименталь репликация белән утыртылды. Тәҗрибәләр һәр участокка 10 орлык кулланып, 0,9 м рәт киңлегендә 1,8 м бер рәткә утыртылды. Читтән йогынты ясамас өчен, һәр тәҗрибәнең периметры буенча ике чик рәте утыртылды. Тәҗрибәләр 2017 елның 20 июлендә һәм 2018 елның 20 июлендә инъекцияләнде, бу вакытта сорго үсемлекләре 3 нче үсеш стадиясендә иде. Бәяләүләр бердән тугызга кадәр шкала буенча алынды, анда авыру билгеләре булмаган үсемлекләргә тугыз балл, ә тулысынча үлгән үсемлекләргә бер балл куелды. 2017 елда ике бәяләү, ә 2018 елда һәр елны инъекциядән соң ике атнадан башлап дүрт күрсәткеч алынды. sAUDPC (авыруның үсеш кәкресе астындагы стандартлаштырылган мәйдан) элек тасвирланганча исәпләнде.
Бастырып чыгару вакыты: 2021 елның 1 апреле