Бу тикшеренү дөге тамырларыннан аерып алынган *Kosakonia oryziphila* NP19 ризосфера симбиотик гөмбәсе *Pyricularia oryziphila* тарафыннан китереп чыгарылган дөге шартлавын контрольдә тоту өчен өметле үсемлек үсешен стимуллаштыручы биопестицид һәм биопестицид булуын күрсәтә. In vitro экспериментлары Khao Dawk Mali 105 (KDML105) сортының ясмин дөге үсентеләренең яңа яфракларында үткәрелде. Нәтиҗәләр NP19ның *Pyricularia oryzae* конидияләренең шытуын нәтиҗәле рәвештә тоткарлавын күрсәтте. *Pyricularia oryzae* инфекциясе өч төрле эшкәртү шартларында тоткарланды: беренчедән, дөге NP19 белән колонизацияләнде һәм *Pyricularia oryzae* конидиясе белән имитацияләнде; икенчедән, яфракларга NP19 һәм *Pyricularia oryzae* конидиясе катнашмасы сиптерелде;
Ризосфера бактериясе *Kosakonia oryziphila* NP1914дөге тамырларыннан аерып алынган (*Oryza sativa* L. cv. RD6). *Kosakonia oryziphila* NP19 үсемлекләрнең үсешен стимуллаштыручы үзлекләргә ия, шул исәптән азотны фиксацияләү, индол сиркәсе кислотасы (IAA) җитештерү һәм фосфат эретү. Кызыклысы шунда ки, *Kosakonia oryziphila* NP19 хитиназа җитештерә14.*Kosakonia oryziphila* NP19 препаратын KDML105 дөге орлыкларына куллану дөге бөҗәкләре инфекциясеннән соң дөгенең яшәүчәнлеген яхшыртты. Бу тикшеренүнең максаты - (i) *Kosakonia oryziphila* NP19 препаратының дөге бөҗәгенә каршы тоткарлау механизмын ачыклау һәм (ii) *Kosakonia oryziphila* NP19 препаратының дөге бөҗәгенә каршы тору йогынтысын тикшерү.
Туклыклы матдәләр үсемлекләрнең үсешендә һәм үсешендә мөһим роль уйный, төрле микроб авыруларын контрольдә тотучы факторлар булып хезмәт итә. Үсемлекнең минераль туклануы аның авыруларга каршы торучанлыгын, морфологик яки тукыма үзенчәлекләрен, һәм вирулентлыгын, ягъни патогеннарга каршы тору сәләтен билгели. Фосфор фенол кушылмалары синтезын арттыру юлы белән үсешне акрынайта һәм дөге бластының авырлыгын киметә ала. Калий, гадәттә, дөге бласты, бактериаль яфрак тапы, яфрак тышчасы тапы, сабак череме һәм яфрак тапы кебек күп дөге авыруларының ешлыгын киметә. Перренуд үткәргән тикшеренү югары калийлы ашламаларның дөгенең гөмбә авырулары ешлыгын киметә һәм уңышны арттыра алуын күрсәтте. Күп санлы тикшеренүләр күкертле ашламаларның культураларның гөмбә патогеннарына каршы торучанлыгын яхшырта алуын күрсәтте.27Артык магний (хлорофилл компоненты) дөге шартлавына китерергә мөмкин.21Цинк патогеннарны турыдан-туры үтерә ала, шуның белән авыруның авырлыгын киметә.22Кыр сынаулары күрсәткәнчә, басу туфрагында фосфор, калий, күкерт һәм цинк концентрациясе чүлмәк экспериментындагыга караганда югарырак булса да, дөге дросселы дөге яфраклары аша тарала. Туфрактагы туклыклы матдәләр дөге дросселын контрольдә тотуда бик нәтиҗәле булмаска мөмкин, чөнки чагыштырма дымлылык һәм температура патогеннарның көчле таралуы өчен тискәре.
Кыр сынауларында барлык дәвалауларда да Stenotrophomonas maltophilia, P. dispersa, Xanthomonas sacchari, Burkholderia multivorans, Burkholderia diffusa, Burkholderia vietnamiensis һәм C. gleum ачыкланган. Stenotrophomonas maltophilia бодай, солы, кыяр, кукуруз һәм бәрәңге ризосферасыннан аерылып алынган һәм биоконтроль күрсәткән.эшчәнлекColletotrichum nymphaeae'га каршы.28 Моннан тыш, P. dispersa'ның кара тәнлеләргә каршы нәтиҗәле булуы хәбәр ителә.череүтатлы бәрәңге.29 Моннан тыш, Xanthomonas sacchari R1 штаммы Burkholderia китереп чыгарган дөге шартлавына һәм паникул череүгә каршы антагонистик активлык күрсәтте.glumae.30Burkholderia oryzae NP19 дөге тукымасы белән шытым вакытында симбиотик мөнәсәбәт урнаштыра һәм кайбер дөге сортлары өчен эндемик симбиотик гөмбәгә әйләнә ала. Башка туфрак бактерияләре дөгене күчереп утыртканнан соң колонияләштерә алса да, NP19 шартлау гөмбәсе, колонияләштерелгәннән соң, дөгенең бу авыруга каршы саклану механизмында күп факторларга йогынты ясый. NP19 P. oryzae үсешен 50% тан артыкка бастырмый гына (онлайн кушымтадагы S1 өстәмә таблицасын карагыз), ә яфраклардагы шартлау җәрәхәтләре санын киметә һәм кыр сынауларында NP19 (RBf, RFf-B һәм RBFf-B) белән имитацияләнгән яки колонияләштерелгән дөгенең уңышын арттыра (S3 нче рәсем).
Үсемлек шартлавын китереп чыгаручы Pyricularia oryzae гөмбәсе - инфекция вакытында хуҗа үсемлектән туклыклы матдәләр таләп итә торган гемитрофик гөмбә. Үсемлекләр гөмбә инфекциясен бастыру өчен реактив кислород төрләрен (ROS) җитештерә; ләкин Pyricularia oryzae хуҗа җитештергән ROSка каршы тору өчен төрле стратегияләр куллана.31Пероксидазалар патогеннарга каршы торуда роль уйный кебек, шул исәптән күзәнәк тышчасы аксымнарының үзара бәйләнеше, ксилема тышчаларының калынаюы, ROS җитештерү һәм водород пероксидын нейтральләштерү.32Антиоксидант ферментлар ROS җыю системасы буларак хезмәт итә ала. Үзләренең антиоксидант үзлекләре аша супероксиддисмутаза (SOD) һәм пероксидаза (POD) саклану реакцияләрен башлап җибәрергә ярдәм итә, ә SOD беренче саклану линиясе булып хезмәт итә.33Дөгедә үсемлек пероксидазасы активлыгы *Pyricularia oryzae* һәм *Xanthomonas oryzae pv. Oryzae* кебек үсемлек патогеннары белән зарарланганнан соң стимуллаша.32Бу тикшеренүдә, *Magnaporthe oryzae* NP19 белән колонизацияләнгән һәм/яки инокуляцияләнгән дөгедә пероксидаза активлыгы арткан; шулай да, *Magnaporthe oryzae* пероксидаза активлыгына тәэсир итмәгән. Супероксид дисмутаза (SOD), H₂O₂ синтаза буларак, O₂⁻ның H₂O₂га кадәр редукциясен катализлый. SOD үсемлек эчендә H₂O₂ концентрациясен тигезләп, үсемлекләрнең төрле стрессларга чыдамлыгын арттыруда мөһим роль уйный, шуның белән үсемлекләрнең төрле стрессларга чыдамлыгын арттыра³⁴. Бу тикшеренүдә, чүлмәк экспериментында, *Magnaporthe oryzae* инокуляциясеннән 30 көн үткәч (30 DAT), RF һәм RBF төркемнәрендә SOD активлыгы R төркемендәгеләргә караганда 121,9% һәм 104,5% югарырак булган, бу *Magnaporthe oryzae* инфекциясенә SOD җавабын күрсәтә. Чүлмәктә дә, кыр экспериментларында да, *Magnaporthe oryzae* NP19 белән капланган дөгедәге SOD активлыгы, капланганнан соң 30 көн үткәч, капланмаган дөгедәгегә караганда, тиешенчә 67,7% һәм 28,8% югарырак булган. Үсемлекләрнең биохимик реакцияләренә әйләнә-тирә мохит, стресс чыганагы һәм үсемлек төре³⁵ тәэсир итә. Үсемлекләрнең антиоксидант фермент активлыгына турыдан-туры әйләнә-тирә мохит факторлары тәэсир итә, алар үз чиратында үсемлекләрнең микроблар җәмгыятен үзгәртеп, үсемлекләрнең антиоксидант фермент активлыгына тәэсир итә.
Бу тикшеренүдә кулланылган дөге шартлавы авыруы гөмбәсе (Kosakonia oryziphila NP19, NCBI теркәү номеры PP861312) штаммы иде13Таиландның Накхон Фаном провинциясендә RD6 дөге сорты тамырларыннан аерып алынган (16° 59′ 42.9″ N 104° 22′ 17.9″ E). Бу штамм туклыклы шулпада (NB) 30°C температурада һәм 150 әйләнү/мин тизлектә 18 сәгать дәвамында үстерелде. Бактерия концентрациясен исәпләү өчен, 600 нм да бактерия суспензиясенең сеңүчәнлеге үлчәнде. Бактерия суспензиясенең концентрациясе түбәндәгечә көйләнде:10⁶CFU/мл стериль деионизацияләнгән су белән (dH₂O). Дөге гөмбәсе (Pyricularia oryzae) бәрәңге декстроза агарына (PDA) нокталы рәвештә инокуляцияләнде һәм 25°C температурада 7 көн инкубацияләнде. Гөмбә мицелийы дөге кәбеге агары мохитенә күчерелде (2% (w/v) дөге кәбеге, 0,5% (w/v) сахароза һәм 2% (w/v) агар деионизацияләнгән суда эретелде, pH 7) һәм 25°C температурада 7 көн инкубацияләнде. Конидияләрне барлыкка китерү өчен мицелий өстенә сизгер дөге сортының стерильләштерелгән яфрагы (KDML105) куелды һәм 25°C температурада 5 көн дәвамында ультрафиолет һәм ак яктылык астында инкубацияләнде. Конидияләр мицелийны һәм зарарланган яфрак өслеген 10 мл стерильләштерелгән 0,025% (v/v) Tween 20 эремәсе белән йомшак сөртеп җыелды. Гөмбә эремәсе мицелий, агар һәм дөге яфракларын алу өчен сигез катлам марля аша фильтрланды. Суспензиядәге конидий концентрациясе алга таба анализлау өчен 5 × 10⁵ конидий/мл га кадәр көйләнде.
Kosakonia oryziphila NP19 күзәнәкләренең яңа культуралары NB мохитендә 37 °C температурада 24 сәгать дәвамында үстерелеп әзерләнде. Центрифугалаудан соң (3047 × g, 10 мин), күзәнәк гранулалары җыелды, ике тапкыр 10 мМ фосфат-буферланган тоз эремәсе (PBS, pH 7.2) белән юылды һәм шул ук буферда кабат суспензияләнде. Күзәнәк суспензиясенең оптик тыгызлыгы 600 нмда үлчәнде, якынча 1.0 кыйммәте алынды (тулы агар пластиналарына каплау юлы белән билгеләнгән 1.0 × 10⁷ CFU/μl га тиң). P. oryzae конидияләре аларны PBS эремәсендә суспензияләп һәм гемоцитометр ярдәмендә санап алынды. *K. oryziphila* NP19 һәм *P суспензияләре. Яфрак сылавы экспериментлары өчен, K. oryziphila* конидияләре яңа дөге яфракларында 1,0 × 10⁷ CFU/μL һәм 5,0 × 10² конидия/μL концентрацияләрендә әзерләнде. Дөге үрнәген әзерләү ысулы түбәндәгечә иде: дөге үсентеләреннән 5 см озынлыктагы яфраклар киселде һәм дымландырылган сеңдерүче кәгазь белән капланган Петри чынаякларына салынды. Биш эшкәртү төркеме билгеләнде: (i) R: контроль буларак бактериаль инокуляциясез дөге яфраклары, 0,025% (v/v) Tween 20 эремәсе белән тулыландырылган; (ii) RB + F: K. oryziphila NP19 белән инокуляцияләнгән дөге, 2 мкл дөге бластогын китереп чыгаручы гөмбә конидиясе суспензиясе белән тулыландырылган; (iii) R + BF: R төркемендәге дөгегә 4 мкл бласток гөмбә конидиясе суспензиясе һәм K. oryziphila NP19 катнашмасы (күләм нисбәте 1:1) өстәлгән; (iv) R + F: R төркемендәге дөгегә 2 мкл бластер гөмбә конидияләре суспензиясе өстәлде; (v) RF + B: R төркемендәге дөгегә 2 мкл бластер гөмбә конидияләре суспензиясе өстәлде, 30 сәгать инкубацияләнде, аннары шул ук урынга 2 мкл K. oryziphila NP19 өстәлде. Барлык Петри савытлары да 25°C температурада караңгыда 30 сәгать инкубацияләнде, аннары өзлексез яктылык астында куелды. Һәр төркем өч тапкыр формалаштырылды. 72 сәгать культурадан соң, үсемлек тукымалары сканерлаучы электрон микроскопиясе (SEM) ярдәмендә күзәтелде һәм анализланды. Кыскасы, үсемлек тукымалары 2,5% (v/v) глутаральдегидлы фосфат буферына фиксацияләнде һәм этанол эремәләре сериясе аша киптерелде. Углерод диоксиды белән критик ноктада киптергәннән соң, үрнәкләр алтын белән сиптерелде һәм ахырда сканерлаучы электрон микроскоп ярдәмендә тикшерелде.15
Бастырып чыгару вакыты: 2025 елның 15 декабре