DELLA аксымнары сакланаүсеш регуляторларыүсемлек үсешендә эчке һәм тышкы сигналларга җавап итеп үзәк роль уйныйлар. Транскрипция регуляторлары буларак, DELLa'лар үзләренең GRAS доменнары аша транскрипция факторларына (TF) һәм гистон H2A белән бәйләнә һәм промоторларга тәэсир итү өчен җәлеп ителә. Соңгы тикшеренүләр күрсәткәнчә, DELLA тотрыклылыгы трансляциядән соң ике механизм белән көйләнә: үсемлек гормоны тарафыннан индукцияләнгән полиубиквитинация.гиббереллин, бу аларның тиз таркалуына һәм кечкенә убиквитинга охшаган модификатор (SUMO) белән конъюгациясенә китерә, бу аларның туплануын арттыра. Моннан тыш, DELLA активлыгы ике төрле гликозиллашу механизмы белән динамик рәвештә көйләнә: O-фукозиллашу DELLA-TF үзара бәйләнешен көчәйтә, ә O-бәйләнгән N-ацетилглюкозамин (O-GlcNAc) модификациясе DELLA-TF үзара бәйләнешен тоткарлый. Ләкин, DELLA фосфорлашуының роле ачык түгел, чөнки алдагы тикшеренүләр каршылыклы нәтиҗәләр күрсәтте, кайберәүләр фосфорлашу DELLA таркалуын стимуллаштыра яки баса дип фаразлый, ә кайберәүләр фосфорлашу аларның тотрыклылыгына тәэсир итми дип фаразлый. Монда без масса-спектрометрия ярдәмендә Arabidopsis thaliana'дан чистартылган GA1-3 репрессорында (RGA), AtDELLA'да фосфорлашу урыннарын ачыклыйбыз һәм PolyS һәм PolyS/T өлкәләрендә ике RGA пептидының фосфорлашуы H2A бәйләнешен һәм максатлы промоторлар белән RGA ассоциациясен стимуллаштыру юлы белән RGA активлыгын арттыра дип күрсәтәбез. Шунысы игътибарга лаек, фосфорлашу RGA-TF үзара бәйләнешләренә яки RGA тотрыклылыгына тәэсир итмәде. Безнең тикшеренү фосфорлашуның DELLA активлыгын индукцияләүнең молекуляр механизмын ачыклый.
Безнең масса-спектрометрик анализыбыз күрсәткәнчә, Pep1 һәм Pep2 икесе дә GA җитмәгән Ga1 фонында RGAда югары фосфорланган. Бу тикшеренүдән тыш, фосфопротеомик тикшеренүләр дә RGAда Pep1 фосфорлануын ачыклады, гәрчә аның роле әле өйрәнелмәгән булса да53,54,55. Киресенчә, Pep2 фосфорлану элек тасвирланмаган, чөнки бу пептидны бары тик RGAGKG трансгены ярдәмендә генә ачыкларга мөмкин иде. Pep1 фосфорлануын юкка чыгарган m1A мутациясе үсемлекләрдә RGA активлыгын бераз гына киметсә дә, m2A белән кушылганда RGA активлыгын киметүдә өстәмә йогынты ясады (Өстәмә 6 нчы рәсем). Иң мөһиме, Pep1 фосфорлану GA белән көчәйтелгән sly1 мутантында ga1 белән чагыштырганда сизелерлек кимегән, бу GA RGA дефосфорлануын стимуллаштыра, аның активлыгын киметә дигәнне аңлата. GA RGA фосфорлануын бастыру механизмы өстәмә тикшеренүләр таләп итә. Бер мөмкинлек - моңа билгесез протеин киназасын көйләү аша ирешергә мөмкин. Тикшеренүләр CK1 протеин киназасы EL1 экспрессиясенең дөгедә GA тарафыннан кимүен күрсәтсә дә, безнең нәтиҗәләр Arabidopsis EL1 гомологының (AEL1-4) югарырак дәрәҗәдәге мутацияләре RGA фосфорлашуын киметмәвен күрсәтә. Безнең нәтиҗәләргә туры китереп, Arabidopsis AEL артык экспрессияләү линияләрен һәм ael өчләтә мутантны кулланып үткәрелгән фосфопротеомик тикшеренү бу киназларның субстратлары буларак DELLA аксымнарын ачыкламады56. Кулъязманы әзерләгәндә, бодайда (Triticum aestivum) GSK3/SHAGGY-сыман киназаны кодлаучы ген GSK3 DELLA (Rht-B1b)57 фосфорлаша ала дип хәбәр ителде, гәрчә GSK3 тарафыннан Rht-B1b фосфорлашуы үсемлекләрдә расланмаган булса да. GSK3 катнашында үткәрелгән in vitro ферментатив реакцияләр, аннан соң масса-спектрометрия анализы Rht-B1b-ның DELLA һәм GRAS доменнары арасында урнашкан өч фосфорлашу урыны ачыклады (Өстәмә 3 нче рәсем). Өч фосфорлашу урынында да серин белән аланин алмашулары трансген бодайда Rht-B1b активлыгының кимүенә китерде, бу Pep2 RGA-дагы аланин алмашулары RGA активлыгын киметүе турындагы безнең ачышларыбыз белән туры килә. Ләкин, in vitro аксым деградациясе анализлары фосфорлашуның Rht-B1b57-не дә тотрыклыландыра алуын күрсәтте. Бу Pep2 RGA-дагы аланин алмашулары аның үсемлекләрдәге тотрыклылыгына тәэсир итмәвен күрсәтүче безнең нәтиҗәләрдән аерылып тора. Бодайдагы GSK3 - Arabidopsis 57 дә брассиностероидларга сизгер булмаган аксым 2 (BIN2) ортологы. BIN2 - BR сигнализациясенең тискәре регуляторы, һәм BR BIN2 деградациясенә 58 китереп, үзенең сигнал юлын активлаштыра. Без BR белән эшкәртүнең Arabidopsisта RGA тотрыклылыгын 59 яки фосфорлану дәрәҗәсен киметмәвен күрсәттек (Өстәмә 2 нче рәсем), бу RGAның BIN2 белән фосфорлануы ихтимал түгеллеген күрсәтә.
Барлык санлы мәгълүматлар Excel ярдәмендә статистик анализланды, һәм әһәмиятле аермалар Стьюдентның t-тест ярдәмендә билгеләнде. Сайлау күләмен алдан билгеләү өчен бернинди статистик ысуллар да кулланылмады. Анализдан бернинди мәгълүмат та чыгарылмады; эксперимент очраклы рәвештә сайланмады; һәм тикшеренүчеләр эксперимент һәм нәтиҗәләрне бәяләү вакытында бүленеш турында белделәр. Сайлау күләме рәсемнәрдә һәм чимал мәгълүмат файлларында күрсәтелгән.
Бастырып чыгару вакыты: 2025 елның 15 апреле