DELLA белгечләре сакланганүсеш көйләүчеләреэчке һәм тышкы сигналларга җавап итеп үсемлек үсешендә төп роль уйныйлар. Транскрипцияле регулятор буларак, DELLAлар транскрипция факторларына (TF) һәм H2A гистонына GRAS доменнары аша бәйләнәләр һәм промоутерлар өчен эш итәләр. Соңгы тикшеренүләр күрсәткәнчә, DELLA тотрыклылыгы тәрҗемәдән соң ике механизм белән көйләнә: үсемлек гормоны китергән полиубикуитинациягиббереллин, бу аларның тиз деградациясенә китерә, һәм аларның туплануын арттыручы кечкенә убикуитинга охшаган модификатор (SUMO) белән конвигация. Моннан тыш, DELLA эшчәнлеге динамик рәвештә ике төрле гликозиляция механизмы белән көйләнә: О-фукосиляция DELLA-TF үзара бәйләнешне көчәйтә, ә O-бәйләнгән N-ацетилглукозамин (O-GlcNAc) модификациясе DELLA-TF үзара бәйләнешне тоткарлый. Ләкин, DELLA фосфориляциясенең роле аңлашылмый, чөнки алдагы тикшеренүләр каршылыклы нәтиҗәләр күрсәткән, кайберәүләр фосфориляциянең DELLA деградациясен алга этәрүен яки репрессияләнүен, икенчеләре фосфориляциянең тотрыклылыгына тәэсир итмәвен күрсәтәләр. Монда без GA1-3 репрессорында (RGA), AtDELLA фосфориляция мәйданнарын ачыклыйбыз, Арабидопс талианыннан масса спектрометрия белән чистартылган һәм PolyS һәм PolyS / T өлкәләрендә ике RGA пептидының фосфориляциясен H2A бәйләнешен һәм максатчан промоутерлар белән RGA ассоциациясен көчәйтеп күрсәтәбез. Фосфориляция RGA-TF үзара бәйләнешенә яки RGA тотрыклылыгына тәэсир итмәде. Безнең тикшерү молекуляр механизмны ачып бирә, аның ярдәмендә фосфориляция DELLA эшчәнлеген этәрә.
Безнең масса спектрометрик анализ ачыклады, Pep1 дә, Pep2 дә GA дефицитлы Ga1 фонында RGAда югары фосфориатланган. Бу тикшеренүгә өстәп, фосфопротеомик тикшеренүләр RGAда Pep1 фосфориляциясен дә ачыкладылар, гәрчә аның роле әле өйрәнелмәгән53,54,55. Киресенчә, Pep2 фосфориляциясе моңа кадәр тасвирланмаган, чөнки бу пептидны RGAGKG трансгены ярдәмендә генә табып була. Pep1 фосфориляциясен бетергән m1A мутациясе үсемлекләрдә RGA активлыгын бераз киметсә дә, RGA эшчәнлеген киметүдә m2A белән кушылганда өстәмә эффект булган (өстәмә рәсем 6). Иң мөһиме, GA1 белән чагыштырганда, Pep1 фосфориляциясе GA-көчәйтелгән слай1 мутантта сизелерлек кимеде, бу GA RGA депосфориляциясен алга этәрә, аның эшчәнлеген киметә. GA RGA фосфориляциясен баса торган механизм алга таба тикшерүне таләп итә. Бер мөмкинлек - бу билгесез белок киназын көйләү ярдәмендә ирешелә. Тикшеренүләр күрсәткәнчә, CK1 белок киназ EL1 экспрессиясе GA белән дөгедә көйләнә, безнең нәтиҗәләр шуны күрсәтә: Arabidopsis EL1 гомологының (AEL1-4) югары тәртипле мутацияләре RGA фосфориляциясен киметми. Безнең нәтиҗәләр белән килешеп, күптән түгел Arabidopsis AEL чиктән тыш кысу линияләрен кулланып, фосфопротеомик тикшеренү һәм өч катлы мутант DELLA белгечләрен бу киназларның субстратлары итеп билгеләмәде56. Кулъязманы әзерләгәндә, GSK3, бодайдагы GSK3 / SHAGGY шикелле киназ кодлаучы ген (Triticum aestivum), DELLA (Rht-B1b) 57 фосфорилаты була алуы турында хәбәр ителде, GSK3 тарафыннан Rht-B1b фосфориляциясе расланмаган булса да. GSK3 булганда витро энзиматик реакцияләр, аннары масса спектрометрия анализы Rht-B1b DELLA һәм GRAS доменнары арасында урнашкан өч фосфориляция мәйданын ачыклады (өстәмә рәсем 3). Өч фосфориляция мәйданында аланинны алмаштыру, трансген бодайда Rht-B1b активлыгының кимүенә китерде, Pep2 RGAдагы аланин алмаштыру RGA активлыгын киметте. Ләкин, витро белок деградациясе фосфориляциянең Rht-B1b57 тотрыклыландыра алуын тагын бер кат күрсәтте. Бу безнең нәтиҗәләрдән аермалы, Pep2 RGAдагы аланинны алмаштыру плантадагы тотрыклылыгын үзгәртми. Бодайдагы GSK3 - Арабидопсдагы брассиностероид-ваемсыз белок 2 (BIN2) ортологы. BIN2 - BR сигнализациясенең тискәре көйләүчесе, һәм BR сигнал юлын BIN2 деградациясенә китереп активлаштыра.
Барлык санлы мәгълүматлар Excel ярдәмендә статистик анализ ясалды, һәм студентларның т-тесты ярдәмендә зур аермалар билгеләнде. Ampleрнәк күләмен алдан билгеләү өчен бернинди статистик ысул да кулланылмады. Анализдан бернинди мәгълүмат та читтә калмады; эксперимент очраклы булмаган; һәм тикшерүчеләр эксперимент һәм нәтиҗәләрне бәяләү вакытында бүлеп бирү турында беләләр иде. Ampleрнәк үлчәмнәр фигуралы легендаларда һәм чимал файлларында бирелгән.
Пост вакыты: 15-2025 апрель